腹泻原性大肠菌（Diarheagenic
coli E .
），人类腹痛、腹泻症引起大肠杆菌的总称，性质和症状的不同，7种被分类。
本试剂盒，多路PCR遗传基因放大，其扩增产物进行确认，在日本主要被报告的5种的致病基因的保有状况确认。
特长
三种混合用底漆，肠管病原性大肠菌（EPEC），
肠管出血性大肠菌（EHEC），肠道毒素性大肠菌（ETEC），
肠管侵入性大肠菌（EIEC），肠管凝集性大肠菌（EAEC）的病原性有关的遗传基因可检测
检测结果数值化，从而容易判定可能
配套元件的构成
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个别名称 |
容量 |
数量 |
|
试剂A |
AptaTaq DNA主人（5×Conc .）* |
1.2毫升 |
一本书 |
|
试剂B |
PCR附录 |
1.1毫升 |
一本书 |
|
试剂C |
引物混合1 |
0.4毫升 |
一本书 |
|
试剂D |
引物混合2 |
0.4毫升 |
一本书 |
|
试剂E |
引物混合3 |
0.4毫升 |
一本书 |
|
试剂F |
积极控制 |
0.4毫升 |
一本书 |
|
试剂G |
6×装入缓冲区（BPB·XC） |
1.2毫升 |
一本书 |
* AptaTaq DNA主人（5×Conc设置Roche Diagnostics K . K .的商品。
操作步骤
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增菌、分离培养 |
大肠菌分离的 |
|
DNA抽出 |
鹿genius
®
DNA抽出试剂使用DNA模板调制 |
|
PCR |
3种多路PCR进行 |
|
电泳 |
3%琼脂糖凝胶电泳进行 |
|
检测 |
溴化乙锭溶液检测PCR检测，片段 |
|
判定 |
专用的计算表结果输入，病原型的进行判断 |
解析
电泳模式
100 : 100个基点DNA梯形
P：积极的控制
1：ATCC
®
35150（EHEC）
2：ATCC
®
43887（EPEC）
3：ATCC
®
35401（ETEC）
4：ATCC
®
43893（EIEC）
5：ATCC
®
25922（非病原性大肠菌）
6～10：临床分离股票
泳动条件，3%琼脂糖KANTO A的酒馆熊猫聚会（1×TBE缓冲液），Mupid – exU运用，100伏35分钟。
13孔的梳子，用样品8μL电器了泳动了。
*使用了琼脂糖凝胶，一张凝胶13孔梳子3个刺制作着。
|
|
样品号码 |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
系数的合计值 |
97 |
1 |
24 |
4 |
0 |
97 |
1 |
24 |
16 |
2 |
|
病原型的判定 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
EIEC |
其他 |
EHEC |
EPEC |
ETEC |
ETEC |
EAEC |
检测基因和其PCR扩增产物尺寸
|
系数 |
放大尺寸（bp） |
目标领域 |
|
Reaction
mixture 1 |
1 |
速率 |
eaeA |
|
32 |
132 |
stx 1 |
|
64 |
93 |
stx 2 |
|
Reaction
mixture 2 |
16 |
130 |
est |
|
8 |
62 |
elt |
|
Reaction
mixture 3 |
2 |
575 |
aggR |
|
4 |
可以 |
invE |
|
内标
控制 |
120 |
rDNA 16 s |
* <em>InvE</em>基因，质粒上有侵入性基因的缘故，脱落的情况。
①3个多路PCR的电泳结果从乐队读取模式。
②这电泳乐队的有无的结果用，
分析用EXCEL表
二进法输入，病原型的判定进行。
③16 s rDNA阳性的情况，大肠杆菌的估计。
合计点和腹泻原性大肠菌的病原型
|
合计点 |
病原型 |
|
0 |
EHEC / STEC，EPEC，ETEC，EIEC，EAEC以外的大肠菌或必须是近亲的微生物 |
|
1 |
EPEC |
|
2 |
EAEC |
|
4～7 |
EIEC |
|
8～11 |
ETEC（+）<em>elt</em> |
|
16～19 |
ETEC（+）<em>est</em> |
|
24～27 |
ETEC（<em>est</em> +、<em>elt</em> +） |
|
32～35 |
EHEC / STEC（+）<em>stx 1</em> |
|
64～67 |
EHEC / STEC（+）<em>stx 2</em> |
|
96～99 |
EHEC / STEC（<em>stx 1</em> +、<em>stx 2</em> +） |
|
上述以外 |
混合被怀疑感染 |
* EIEC
和痢疾杆菌区别不能。
合计点
36
的情况，志賀痢疾杆菌的可能性被怀疑。
stx（＊2志賀毒素
2
基因型地产生），根据变体检测不能的情况。
例）stx 2f
产品信息
|
产品名 |
包装 |
产品编号 |
鹿genius
®
致病基因检测试剂盒（PCR腹泻原性大肠菌用） |
一包（100次） |
08087 – 96 |
鹿genius
®
DNA抽出试剂 |
一包（120次） |
08178 – 96 |
最新的价格是
Cica – Web
请参照。
其他厂家的商品相关的许可证、专利方面，各厂商请确认。
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POT套件·PCR套件
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分离培养基
|
产品名 |
包装 |
产品编号 |
|
黑藻アガーSTEC生培养基 |
10张 |
72090 |
最新的价格是
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请参照。
电泳相关
|
产品名 |
包装 |
产品编号 |
|
琼脂糖KANTO A的酒馆熊猫聚会了 |
100克 |
01089 – 23 |
|
10×TBE缓冲液 |
一L |
46510 : 79 |
|
溴化乙锭溶液（2毫克/毫升瓶装），眼药水 |
10毫升 |
14575 : 43 |
|
Quick‐Load 100个基点DNA Ladder |
gel lanes 125 |
49881 – 04 |
|
TriDye 100个基点DNA Ladder |
gel lanes 125 |
49881 – 60 |
|
6倍浓缩装入缓冲器 |
2 mL×6本 |
24080 – 96 |
最新的价格是
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请参照。
参考文献
1）公立大学法人大阪市立大学，KALS株式会社，株式会社二共刃型工業；“腹泻原性大肠杆菌检测方法”，专利公开2008 – 283895
2）Ruttler，M . E .
el at
您
Biocell
您
30
（2）: 301 – 308，2006
3）Hiroe，A
et al
您
Appl，Environ，Microbiol
您
78
（9）：3177 – 3184，2012
宣传手册、说明书（PDF）
小册子鹿genius®病原基因检测PCR配套元件（腹泻原性大肠菌用）（436 KB）
小册子基因检测相关产品指南（2.3 MB）
取扱说明书（390 KB）
计算表（ZIP文件，Excel）
分析用EXCEL表
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